生物素标记需要避光吗（如何用光敏生物素标记质粒）
生物素标记需要避光。根据查询相关公开信息显示，生物素分子很容易被光分解，生物素分子中的双键很容易接受光的激发，分解产生紫外光和活性自由基等物质，这些分解产物会破...
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生物素标记需要避光吗
生物素标记需要避光。根据查询相关公开信息显示，生物素分子很容易被光分解，生物素分子中的双键很容易接受光的激发，分解产生紫外光和活性自由基等物质，这些分解产物会破坏生物素和被标记分子之间的化学结合，进而影响实验结果的准确性和稳定性。
如何用光敏生物素标记质粒
如何用光敏生物素标记质粒
常将放射性同位素如32 P连接到某种脱氧核糖核苷三磷酸（dNTP）上做为标记物，然后通过切口平移法标记探针。
切口平移法（nick translation）是利用大肠杆菌DNA聚合酶I (E.coli DNA polymerase I) 的多种酶促活性将标记的dNTP掺入到新形成的DNA链中去，形成均匀标记的高比活DNA探针。其操作方法如下：
⑴取1?g DNA溶于少量无菌双蒸水中，加入5?l距离大约10×切口平移缓冲液 (0.5mol/L Tris－HCl，PH7.2；0.1 mol/L MgSO4 ；1mmol/L二硫苏糖醇；500?g/mL牛血清白蛋白），加入除标记物（如?-32 p-dATP）外的其它三种dNTP（如dCTP，dGTP，dTTP）溶液，20mmol/L溶液各1?l。
⑵加入100?ci（10?l）标记物溶液，加入无菌双蒸水至终体积为46.5?l，混匀，加入0.5?l稀释的DNaseI溶液，混匀；加入1?l（约5单位）E.coli DNA polymerase I，混匀。
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